来看一下引物和探针设计的通用原则

返回列表 来源: 发布日期:2022-07-25

基本上把引物探针设计原则都说的很清楚了,只要按照上面的原则一般都能设计出比较好的引物探针。
  网上应该可以找到很多关于引物设计的原则和注意事项,然而并没有什么用。引物探针基本上都是软件设计的,比如PP5、PrimerExpress、Beacon Designer等,我们不需要管那么多原则。如果软件不能设计出比较好的引物探针,那剩下的就是我们的体力活了,一条一条引物探针进行筛选。引物探针设计主要的不是设计,而是引物探针的评估。引物探针评估的时候反而这些原则才有用场。所以大家不要用反了顺序。(这段话是经验之谈,仅供参考)
  首先blast是否特异,然后评估Tm值确定试验退火温度,然后评估二聚体结构,再评估引物探针发夹结构。这些结构的存在都会影响PCR反应效率。
  需要提醒的一点,软件设计出来非常好的引物探针,试验结果可能不会好,但是大部分时候都非常可靠。还有就是每个软件Tm值、二聚体、发夹结构计算方式不一样,得到的结果也会有差异啊。
  标签:复合探针

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